摘要： 本研究旨在构建CD46原核表达系统，通过大肠杆菌高效表达并纯化CD46-His融合蛋白。将CD46基因与pET-30a(+)质粒连接，构建重组表达载体，并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行目标蛋白的表达。通过超声破碎和高速离心法收集包涵体，随后采用8 mol尿素变性液对蛋白质进行变性处理，并利用含有精氨酸的复性液促使其重新折叠，获得可溶性CD46蛋白。进一步通过阴离子交换柱Hitrap™和AKTA纯化系统的分子筛HiLoad™ 16/600 Superdex 200 pg对CD46蛋白进行纯化，以获得高均一性和高纯度的蛋白产物。本研究成功构建了pET30a-CD46重组载体，并实现了目标蛋白的高效表达。采用8 mol尿素变性和精氨酸复性法，从包涵体中获得了可溶性CD46蛋白，变性效率达8.5%。通过离子交换层析和分子筛纯化，最终获得了纯度超过95%的单体CD46蛋白，蛋白得率为28.51%。相比传统真核表达系统，该方法具有周期短、成本低、产量高的优势。本研究为大规模制备CD46蛋白提供了一种简便高效的方法，为进一步研究BVDV感染机制和开发相关诊断试剂奠定了基础，同时也为后续的CD46晶体学研究提供了原核表达纯化方案。此外，这种经济实用的原核表达策略还可为其他膜蛋白的表达纯化提供参考。
 [关键词] CD46|BVDV|原核表达系统|蛋白质纯化|蛋白质变性

关键词: CD46, BVDV, 原核表达系统, 蛋白质纯化, 蛋白质变性

中图分类号: 

• S852.65