摘要： 为改造黑曲霉来源的β-甘露聚糖酶基因Man26A，获得耐温性重组β-甘露聚糖酶，本试验通过易错PCR技术（在PCR体系中加入不同水平的MnCl2），将目的基因Man26A克隆至载体pGAPZαA上，构建重组质粒pGAPZαA-Man26A，将重组质粒电转化至毕赤酵母GS115中，在含有100 μg/mL博来霉素的YPDS平板上筛选耐温性突变体，并测定重组酶的酶学性质。本试验筛选出2株产耐温性β-甘露聚糖酶的重组突变体3-228和4-59，两重组酶的最适pH和温度分别为5.0和45 ℃，均与野生型酶相同，但与野生型相比，两重组酶的工作温度范围更加宽泛，且温度稳定性显著提高|金属离子Fe2+、Mg2+、Mn2+、K+、Ca2+、Co2+对β-甘露聚糖酶活力有不同程度的激活作用，SDS、EDTA、Cd2+、Cu2+、Ni2+、Ag2+、Fe3+、Pb2+等对酶活力有不同的抑制作用。2个耐温性重组β-甘露聚糖酶均具有工作温度范围广、耐温性强等特点，提高了其在饲料工业上的应用潜力，证明了易错PCR技术是提高酶温度稳定性的有效方法。
[关键词] β-甘露聚糖酶|易错PCR|耐温性|酶学性质

关键词:  , β-甘露聚糖酶, 易错PCR, 耐温性, 酶学性质

中图分类号: 

• S816.7 

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