摘要： 大豆中含有多种蛋白类抗营养因子，如过敏原蛋白、凝集素等，它们引起的抗营养反应在一定程度上影响了其在饲料中的应用。由于这些蛋白结构复杂且缺乏标准品，因此很难实现其在大豆及大豆加工产品中的准确定量检测。为此，本实验旨在建立一种基于高效液相色谱串联质谱技术（HPLC-MS/MS）的大豆中主要蛋白类抗营养因子的同步检测方法。首先将采集到的样品通过Tris-HCl缓冲液超声提取得到蛋白提取液，经过胰蛋白酶酶膜上酶解得到多肽洗脱液，同时将同位素标记的内标标准肽段加入到酶解多肽洗脱液中，然后将所得上清液转移到样品瓶中进行HPLC-MS/MS分析。HPLC-MS/MS分析采用Waters XBridge® Peptide BEH C18色谱（2.1 mm × 100.0 mm，3.5 μm），以含有0.3%甲酸的水溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱，在18 min内即可完成一个样品的检测，质谱数据采集采用多反应监测模式。结果表明：15种蛋白的定量肽段在3.2~1000 ng/mL内呈现良好的线性关系，相关系数（R2）为0.995~0.999，空白发酵豆粕基质添加各肽段的平均回收率为84.9%~122.3%，相对标准偏差小于12.3%，可以满足大豆和大豆加工产品中蛋白类抗营养因子的测定需求。通过对实际样品的检测与分析，发现几种加工工艺中酶解法消敏效果最佳，膨化法与大豆浓缩蛋白的消敏效果次之，发酵法消敏效果最差。此外，通过本实验的样品检测结果，可以得出大豆和大豆加工产品中12种蛋白类抗营养因子的含量，这些数据可以为大豆加工工艺的评估和改进提供技术支持。
[关键词] HPLC-MS/MS|大豆|过敏原|抗营养因子

关键词:  , HPLC-MS/MS, 大豆, 过敏原, 抗营养因子

中图分类号: 

•  

• S816.17